To jedna z dwóch zabytkowych świątyń prawosławnych mieszczących się przy Aušros Vartų gatvė (ul. Ostrobramska). Cerkiew Ducha Świętego została wzniesiona w XVII wieku na mocy decyzji króla Zygmunta III Wazy. Świątynia była kilkakrotnie rozbudowywana. Obecny jej wygląd zawdzięczamy ostatniej renowacji z lat 1749–1753.
Cerkiew jest bardzo ważnym ośrodkiem prawosławia na Litwie. W jej podziemiach pochowane były szczątki chrześcijańskich męczenników: dworzan Antoniusza, Jana i Eustachego. Postradali oni życie rzekomo z rąk Księcia Olgierda w 1347 roku za przejście na prawosławie. Podobizny męczenników widnieją na fresku przy głównym wejściu.
Cerkiew jest także ciekawym obiektem pod względem swej architektury, a przede wszystkim z racji bogatej ornamentyka stiukowej. W cerkwi znajduje się potrójny rokokowy ikonostas. Bazylikowe wnętrze, pełne bogatej ornamentyki, z trzema nawami, urządzone jest na planie krzyża łacińskiego. Cerkiew ma dwie zakrystie i kruchtę. Obok stoi dzwonnica z 1638 r. oraz dwa czynne klasztory prawosławne: męski oraz żeński.